《中华人民共和国药典》2020年版四部中规定：常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、辐射灭菌法、气体灭菌法、过滤除菌法、汽相灭菌法、液相灭菌法。可根据被灭菌物品的特性采用一种或多种方法组合灭菌。严格的灭菌操作非常重要，会影响整个实验能否顺利的开展，笔者根据日常实际操作情况选择了相适应的灭菌方法进行操作，并对其方法进行了汇总如下：

一、湿热灭菌

通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质、核酸变性而杀灭微生物的方法。

分为三种：

1、煮沸灭菌：加热使水至沸而杀灭细菌的方法。凡不适于高压蒸汽灭菌的物品可常压下在水中煮沸一段时间达到灭菌目的。

2、流通蒸汽灭菌：常压下，用蒸笼、蒸锅等在100℃灭菌。仅可杀死细菌繁殖体，不能完全杀灭芽孢。

3、高压蒸汽灭菌：通过加压提高蒸汽温度，穿透力强、温度高、灭菌效果最好。是最可靠最适用最广泛的灭菌方法，一般采用121℃高压灭菌15～20min或者116℃高压灭菌30min。培养基、胶塞、玻璃器材等凡耐高温和潮湿的物品可应用本法灭菌。灭菌时，容器不可密封，需与灭菌锅内空气流通。完全排出高压灭菌器内的冷空气。（冷空气存在时，同一表压下所达到的温度值偏低，不符合规定的要求，灭菌就不彻底）。

二、干热灭菌

利用热空气传递或高温灼烧进行的灭菌，杀死微生物和芽孢。

分为二种：

1、灼烧主要用于接种工具灭菌，如接种针、接种环、刀、剪、等在火焰上烧灼即可达到彻底灭菌。将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等在火焰旁进行无菌操作，利用火焰对管口等进行灭菌，防止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。

2、干热空气灭菌是利用热辐射及干热空气进行灭菌，一般使用于金属物品、玻璃器材等不能与蒸汽接触的物品灭菌，须在160℃～170℃左右保持恒温2～3小时。

三、紫外线灭菌

利用紫外灯进行辐射灭菌。可以对微生物蛋白质的破坏使其灭活。

1、在实际操作中，无菌室内的净化工作台、生物安全柜、传递窗等安装紫外灯。一般仅起杀死空气中、物体表面、地面等部分微生物的作用，紫外线辐射的穿透力很弱，而不能起到完全灭菌的作用。

2、紫外线消毒方法验证中紫外灯需确认的参数主要有紫外线的波长、紫外线强度、灯管的寿命。

3、紫外灯消毒的效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关，还需通过验证来确定。

4、紫外线直射对眼、皮肤有损害。紫外线照射过程中产生臭氧，臭氧过多对眼及鼻腔有刺激，产生头晕、胸闷、血压降低，所以无菌室及净化工作台紫外线照射停止后，请稍等片刻，让臭氧消散，方可进行实验操作。

四、除菌过滤

以物理的方法除去介质中的微生物。常将空气或液体中的微生物及杂质用不同材料制成的薄膜滤器过滤得到无菌、无杂质的空气或液体。

滤过细菌的滤膜孔径为0.22μm（或更小孔径或相同过滤效力）。

总结：在检验过程中，无论采用什么方法，都应考虑到原有成分的稳定性和安全性，对灭菌条件除了要求经济性、环保性和灭菌彻底外，还要必须保证被灭菌物质成分不被破坏。不影响物品的质量。